Během akce se mimořádně otevře hlavní budova Muzea Prahy, která je od roku 2020 uzavřena kvůli rekonstrukci. Objekt je už opraven, nová expozice v něm zatím není. Výstavní prostory proto na jednu noc zaplní díla studentů ateliéru Intermédia 1 Akademie výtvarných umění (AVU). Před hlavní budovou Muzea Prahy na Florenci bude také doprovodný program. Nabídne aktivity pro děti, hudební vystoupení, food tracky a při vhodném počasí také desetimetrový nafukovací model měsíce. Muzeu ho zapůjčí Hvězdárna a planetárium Brno.

Pražský dopravní podnik vypraví speciální muzejní linky, tři tramvajové a jednu autobusovou. Číslo 33 bude jezdit mezi Hlubočepy a Náměstím Bratří Synků, číslo 34 mezi Královkou a Výstavištěm, číslo 35 mezi Strossmayerovým náměstím a Špejcharem a číslo 888 pojede po trase Špejchar, Malostranská, Staroměstská, Náměstí Republiky, Florenc, Hlavní nádraží, Muzeum, I. P. Pavlova, Vyšehrad a zpět. V provozu budou od 19:00 do 24:00 hodin, platí na nich běžný tarif Pražské integrované dopravy.

První ročník Pražské muzejní noci se uskutečnil v roce 2004, akce byly velice oblíbené, návštěvnost v některých ročnících dosahovala ke 200.000 lidí. Sérii přerušila pandemie onemocnění covid-19. Tradici obnovilo Muzeum Prahy v minulém roce, kdy se dohodlo s Národním muzeem na poskytnutí ochranné známky a konceptu Pražské muzejní noci. K akci se loni připojilo asi 30 institucí, které navštívilo dohromady 35.000 lidí.